Plásmido CRISPR de Activación (h) Annexin I: sc-401024-ACT

El gen humano **ANXA1** codifica la anexina I, una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de Ca²⁺ que se asocia con las membranas celulares para regular el tráfico vesicular, la remodelación del citoesqueleto y la reparación de membranas. La anexina I es un mediador importante de la resolución de la inflamación y de la señalización inmunitaria innata; influye en la actividad de la fosfolipasa A2 y en la producción de eicosanoides, y modula la migración de leucocitos y la eferocitosis. También se la ha vinculado con vías que gobiernan la proliferación celular, la apoptosis y la dinámica epitelio–mesénquima, con funciones dependientes del contexto en las respuestas al estrés. Se ha descrito una expresión desregulada de **ANXA1** en trastornos inflamatorios y en múltiples tipos de cáncer, donde se estudia como regulador de la señalización del microambiente tumoral y de fenotipos metastásicos.

Annexin I El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANXA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Annexin I El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANXA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANXA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Annexin I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANXA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Annexin I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Annexin I en células tumorales con expresión de ANXA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.