Ankyrin G CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400421-ACT

Das humane Gen **ANK3** kodiert **Ankyrin G**, ein multifunktionales Adapterprotein, das integrale Membranproteine mit dem Spektrin‑Aktin‑Zytoskelett verbindet, spezialisierte Membrandomänen organisiert und Proteinkomplexe stabilisiert. Ankyrin G ist für neuronale Polarität und Erregbarkeit essenziell, da es spannungsabhängige Natriumkanäle und weitere Komponenten am Axoninitialsegment und an den Ranvier-Schnürringen clustert; zudem trägt es zur Organisation epithelialer Membranen bei. Über diese Gerüstfunktionen beeinflusst Ankyrin G den Umbau des Zytoskeletts, den Membrantransport und Signaltransduktionswege, die Zellarchitektur und Kommunikation koordinieren. Genetische Studien und Expressionsanalysen haben eine Fehlregulation von **ANK3** mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Bedeutung für mechanistische Forschung zu neuronalen Schaltkreisen und zur Biologie von Membrandomänen unterstreicht.

Ankyrin G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANK3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ankyrin G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANK3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANK3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ankyrin G-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANK3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ankyrin G-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ankyrin G-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANK3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.