ANKS6 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406150-LAC

L’ANKS6 umano codifica una proteina scaffold contenente ripetizioni di anchirina e un dominio SAM, implicata nello sviluppo del nefrone e nella segnalazione associata alle ciglia. ANKS6 partecipa all’assemblaggio di complessi proteici nelle ciglia primarie e nei corpi basali, sostenendo vie che coordinano la polarità planare delle cellule, la morfogenesi epiteliale e la tubulogenesi. L’alterazione genetica di ANKS6 è stata collegata a fenotipi da ciliopatia, inclusa la malattia renale correlata alla nefronoftisi, in cui difetti della funzione ciliare contribuiscono a rimodellamento cistico e fibrotico. In quanto nodo regolatorio della segnalazione dipendente dalle ciglia, ANKS6 viene studiata in modelli di differenziazione dell’epitelio renale e in sistemi che indagano la polarità cellulare e le risposte meccanosensoriali.

Le particelle di attivazione lentivirale ANKS6 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ANKS6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ANKS6 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ANKS6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ANKS6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ANKS6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.