ANKH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419107

Panoramica

Mouse Ank codifica ANKH, una proteina di membrana multipasso che regola il trasporto del pirofosfato inorganico (PPi) attraverso la membrana plasmatica e contribuisce a mantenere l’omeostasi extracellulare del PPi. Modulando l’equilibrio tra PPi e fosfato, ANKH influenza la biomineralizzazione, la deposizione di minerale nella matrice e processi associati a osteociti/condrociti legati allo sviluppo scheletrico e alla calcificazione dei tessuti. La funzione di ANKH interseca vie che controllano il metabolismo dei minerali e il rimodellamento della matrice extracellulare, rendendola rilevante per studi sulla calcificazione aberrante e su fenotipi articolari o ossei. La perturbazione di Ank viene quindi utilizzata per indagare i meccanismi che collegano la gestione del PPi alla differenziazione cellulare e agli esiti della deposizione minerale in vivo e in colture di cellule murine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANKH (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ank in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ank insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ank a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANKH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ank per lo studio della segnalazione di ANKH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ank critici per la funzione di ANKH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ank per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANKH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ANKH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ank. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANKH Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ANKH (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ank per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ank definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.