Anillin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403342-ACT

ANLN codifica per anillin, una proteina scaffold conservata che lega l’F-actina e la miosina II e coordina l’assemblaggio dell’anello contrattile, l’ingressione del solco di divisione e il completamento della citochinesi. Anillin integra i segnali derivanti dalle dinamiche actomiosiniche regolate da RhoA/ROCK con l’organizzazione delle septine e il rimodellamento della membrana e del citoscheletro, per garantire una corretta segregazione cromosomica e divisione cellulare. Un’espressione deregolata di ANLN è associata a proliferazione aberrante, instabilità genomica e alterazioni del controllo del ciclo cellulare, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato negli studi di biologia tumorale e di fedeltà mitotica. In quanto organizzatore del citoscheletro, anillin supporta anche ricerche su tensione corticale, arrotondamento cellulare e architettura dei tessuti epiteliali.

Anillin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANLN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Anillin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANLN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANLN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Anillin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANLN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Anillin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Anillin nelle cellule tumorali con espressione di ANLN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.