Angptl4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401369-ACT

ANGPTL4 kodiert Angiopoietin-like 4 (Angptl4), ein sezerniertes Glykoprotein, das durch Nährstoff- und Sauerstoffsignale induziert wird und den Lipidstoffwechsel sowie die Gefäßbiologie moduliert. Angptl4 hemmt die Lipoproteinlipase, um den Stoffwechsel triglyceridreicher Lipoproteine zu regulieren, und greift in durch PPAR-Signale gesteuerte Stoffwechselprogramme ein, wodurch Reaktionen von Fettgewebe und Leber auf Fasten und Entzündung verknüpft werden. Im extrazellulären Milieu kann es das Verhalten von Endothelzellen, die Barrierefunktion und den Umbau der extrazellulären Matrix beeinflussen und so den metabolischen Zustand mit der Gewebehomöostase verbinden. Eine fehlregulierte ANGPTL4-Expression wurde mit Stoffwechselerkrankungen, entzündlichen Mikroumgebungen und tumorassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, was ANGPTL4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Lipidflüssen und vaskulären Reaktionen macht.

Angptl4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANGPTL4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Angptl4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANGPTL4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANGPTL4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Angptl4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANGPTL4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Angptl4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Angptl4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANGPTL4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.