ANG III Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419105

Panoramica

Il gene Ang3 del topo codifica l’angiopoietina-3 (ANG III), un ligando secreto della tirosin-chinasi recettoriale TEK/TIE2 che regola lo sviluppo vascolare e l’omeostasi endoteliale. ANG III partecipa alla segnalazione angiopoietina–TIE, che coordina la sopravvivenza delle cellule endoteliali, la maturazione dei vasi, la permeabilità e il rimodellamento in concertazione con segnali dipendenti dal VEGF. Un’attività alterata della via delle angiopoietine è associata ad angiogenesi deregolata e a risposte vascolari infiammatorie, rilevanti per studi sulla vascolarizzazione tumorale, il danno ischemico e i meccanismi delle patologie retinovascolari. In quanto modulatore dipendente dal contesto della segnalazione endoteliale, Ang3 rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare il controllo microambientale della stabilità vascolare e della perfusione tissutale in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANG III (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ang3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ang3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ang3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANG III.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ang3 per lo studio della segnalazione di ANG III, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ang3 critici per la funzione di ANG III
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ang3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANG III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ANG III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ang3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANG III Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ANG III (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ang3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ang3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.