ANG I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401766

Panoramica

Angiogenina (ANG), indicata anche come ANG I, è un membro secreto della superfamiglia RNasi A che regola la segnalazione angiogenica e il metabolismo dell’RNA adattativo allo stress. ANG può traslocare nel nucleo e promuovere la trascrizione dell’rRNA, sostenendo la biogenesi dei ribosomi e la capacità proliferativa; inoltre cliva i tRNA generando frammenti indotti dallo stress che modulano la traduzione. Attraverso queste attività, ANG integra segnali extracellulari con programmi di processamento dell’RNA che influenzano il comportamento delle cellule endoteliali, l’infiammazione e la sopravvivenza cellulare in condizioni di stress. Un’espressione o un’attività di ANG deregolate sono state associate a rimodellamento vascolare patologico e a fenotipi neurodegenerativi, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sull’angiogenesi e sulle vie di risposta allo stress dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANG I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ANG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ANG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ANG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANG I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ANG per lo studio della segnalazione di ANG I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ANG critici per la funzione di ANG I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ANG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANG I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ANG I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ANG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANG I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ANG I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ANG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ANG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.