ANG I Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401766-ACT

Il gene umano **ANG** codifica l’angiogenina, una ribonucleasi secreta che si lega a recettori di superficie cellulare e a componenti della matrice extracellulare per influenzare il comportamento delle cellule endoteliali, le risposte allo stress e il metabolismo dell’RNA. ANG partecipa a processi legati all’angiogenesi e alla segnalazione dei nutrienti, inclusa la modulazione di frammenti derivati da rRNA/tRNA e i conseguenti effetti sulla sintesi proteica e sulla sopravvivenza cellulare. Un’espressione o un’attività disregolata di ANG è stata associata al rimodellamento vascolare e a fenotipi neurodegenerativi, ed è spesso studiata in contesti di infiammazione, ipossia e biologia del microambiente tumorale. Queste funzioni rendono ANG un utile punto di partenza per studiare la segnalazione paracrina, i programmi di stress dipendenti dal clivaggio dell’RNA e il crosstalk tra vie di segnalazione che modella l’omeostasi tissutale.

ANG I Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ANG I Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ANG I. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ANG I nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ANG I nelle cellule tumorali con espressione di ANG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.