Androgen Receptor Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400026-LAC

L’AR umano codifica il recettore degli androgeni, un recettore nucleare per ormoni steroidei attivato dal legando che funziona da fattore di trascrizione e controlla geni coinvolti nella differenziazione sessuale, nella biologia riproduttiva e in programmi di crescita specifici del tessuto. In seguito al legame con gli androgeni, AR va incontro ad attivazione conformazionale, traslocazione nel nucleo e legame al DNA in corrispondenza degli elementi di risposta agli androgeni, regolando lo stato della cromatina e la trascrizione tramite il reclutamento di co-regolatori. La segnalazione mediata da AR interseca le reti PI3K–AKT, MAPK e di regolazione del ciclo cellulare, influenzando proliferazione, differenziamento e omeostasi metabolica. L’espressione o la segnalazione deregolate di AR sono implicate nella fisiopatologia ormono-dipendente e AR è ampiamente studiato come determinante molecolare dello stato di linea e della plasticità trascrizionale nei tessuti responsivi agli androgeni.

Le particelle di attivazione lentivirale Androgen Receptor (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Androgen Receptor (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Androgen Receptor. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.