AMPK alpha 2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400277-LAC

PRKAA2 codifica la subunità catalitica α2 della proteina chinasi attivata da AMP (AMPK), un sensore energetico centrale che coordina l’adattamento cellulare a stress nutrizionali ed energetici. AMPKα2 integra i segnali derivanti dal rapporto AMP/ADP rispetto all’ATP per regolare vie metaboliche che includono l’ossidazione degli acidi grassi, l’assorbimento di glucosio, la biogenesi mitocondriale e l’inibizione dei programmi anabolici tramite mTORC1 e i relativi effettori. Nelle cellule umane, l’attività di AMPKα2 influenza l’autofagia, l’omeostasi redox e il controllo del ciclo cellulare, collegando PRKAA2 alla ricerca sulla sindrome metabolica, il diabete di tipo 2, il rimodellamento cardiovascolare e la riprogrammazione metabolica associata al cancro. I suoi ruoli selettivi per isoforma supportano inoltre studi sull’equilibrio energetico specifico di tessuto, sulla dinamica mitocondriale e sulla segnalazione della risposta allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale AMPK alpha 2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRKAA2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale AMPK alpha 2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRKAA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di AMPK alpha 2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRKAA2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.