AMPK alpha 1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400104-LAC

PRKAA1 codifica la subunità catalitica AMPK alfa 1, un sensore energetico centrale che collega le variazioni dei rapporti cellulari AMP/ADP:ATP a programmi di fosforilazione in grado di ripristinare l’omeostasi metabolica. AMPK alfa 1 regola l’assorbimento del glucosio e la glicolisi, l’ossidazione degli acidi grassi, la biogenesi mitocondriale e l’autofagia attraverso assi di segnalazione che intersecano mTORC1, ULK1, ACC e reti trascrizionali collegate a PGC-1. Integrando segnali derivanti da nutrienti, ipossia e stress, PRKAA1 contribuisce a coordinare le decisioni di crescita cellulare, l’equilibrio redox e la proteostasi. La deregolazione della segnalazione AMPK è implicata in fenotipi di malattie metaboliche ed è ampiamente studiata nel contesto del metabolismo delle cellule tumorali, dell’infiammazione e della neurodegenerazione, mentre i ricercatori indagano ruoli dipendenti dal contesto nell’adattamento allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale AMPK alpha 1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRKAA1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale AMPK alpha 1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRKAA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di AMPK alpha 1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRKAA1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.