Amphiphysin II Plasmide Double Nickase (h): sc-401263-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Amphiphysin II Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Amphiphysin II Double Nickase Plasmid (h) e il Amphiphysin II Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BIN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Amphiphysin II Antibody (2F11): sc-23918
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Amphiphysin II Plasmide Double Nickase (h) | sc-401263-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Amphiphysin II Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401263-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BIN1 codifica per l’amfifisina II, una proteina di rimodellamento delle membrane contenente un dominio BAR, che accoppia il legame ai fosfoinositidi al rilevamento della curvatura e all’endocitosi mediata da clatrina. L’amfifisina II partecipa alla formazione di vescicole endocitiche, alla biogenesi dei tubuli T nel muscolo e al traffico di recettori e complessi di segnalazione, collegando la dinamica di membrana all’organizzazione del citoscheletro. Attraverso interazioni mediate dal dominio SH3 con partner quali la dinamina e adattatori endocitici, BIN1 influenza la fissione e la compartimentalizzazione delle membrane, che modellano la segnalazione intracellulare e la funzione sinaptica. Alterazioni dell’espressione di BIN1 o dell’utilizzo delle sue isoforme sono state associate a fenotipi neuromuscolari e BIN1 è implicato geneticamente nella neurodegenerazione, a supporto della sua utilità per modellare in cellule umane difetti del traffico di membrana rilevanti per la malattia.
Amphiphysin II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BIN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BIN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BIN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BIN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.