AMID/AIFM2/FSP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406251

Panoramica

AIFM2, noto anche come AMID/FSP1, codifica una flavoproteina ossidoreduttasi implicata nell’omeostasi redox e nella segnalazione della morte cellulare associata ai mitocondri. FSP1 funziona come ossidoreduttasi del CoQ10 dipendente da NAD(P)H a livello delle membrane, fornendo una difesa indipendente dal glutatione contro la perossidazione lipidica e sopprimendo la morte cellulare per ferroptosi. Grazie ai suoi legami con il controllo delle specie reattive dell’ossigeno, l’integrità dei lipidi di membrana e le risposte apoptotiche/allo stress mitocondriale, AMID/AIFM2 è spesso studiato nella biologia dello stress ossidativo e dell’adattamento metabolico. Un’attività deregolata di AIFM2/FSP1 è stata associata a contesti di resistenza alle terapie e di sopravvivenza delle cellule tumorali, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulle decisioni di destino cellulare in condizioni di stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AMID/AIFM2/FSP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AIFM2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AIFM2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AIFM2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AMID/AIFM2/FSP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AIFM2 per lo studio della segnalazione di AMID/AIFM2/FSP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AIFM2 critici per la funzione di AMID/AIFM2/FSP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AIFM2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AMID/AIFM2/FSP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AMID/AIFM2/FSP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AIFM2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AMID/AIFM2/FSP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AMID/AIFM2/FSP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AIFM2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AIFM2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.