Plásmido CRISPR de Activación (h) Ameloblastin: sc-403086-ACT

AMBN codifica la ameloblastina, una glucoproteína secretada de la matriz extracelular que está altamente enriquecida durante la formación del esmalte y contribuye a la adhesión, polaridad y deposición mineral controlada de los ameloblastos. La ameloblastina participa en la señalización matriz–célula y coordina la diferenciación del órgano del esmalte al modular la organización de la matriz extracelular y los programas epiteliales de desarrollo asociados. Además de sus funciones en la morfogénesis dental, la expresión de AMBN se ha vinculado con la regulación de la migración y la diferenciación celular en contextos de tejidos mineralizados, lo que la hace relevante para estudios del desarrollo craneofacial y de la integridad estructural del esmalte. Por lo tanto, la actividad o expresión desregulada de AMBN es de interés para investigar los mecanismos moleculares subyacentes a los defectos del esmalte y a interacciones más amplias entre epitelio y matriz.

Ameloblastin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AMBN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ameloblastin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AMBN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AMBN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ameloblastin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AMBN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ameloblastin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ameloblastin en células tumorales con expresión de AMBN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.