AMBRA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404108-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AMBRA1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AMBRA1 Double Nickase Plasmid (h) e il AMBRA1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AMBRA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AMBRA1 Antibody (G-6): sc-398204
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AMBRA1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404108-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMBRA1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404108-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBRA1 (autophagy and beclin 1 regulator 1) codifica una proteina scaffold che coordina l’avvio dell’autofagia modulando il complesso BECLIN1/PIK3C3 e integrando segnali provenienti dalle vie dei nutrienti e dello stress. AMBRA1 interagisce anche con la proteostasi dipendente dall’ubiquitina e con il controllo del ciclo cellulare, contribuendo all’omeostasi cellulare attraverso la regolazione del controllo qualità mitocondriale e della segnalazione correlata all’apoptosi. La deregolazione delle reti autofagiche legate ad AMBRA1 è stata associata ad alterazioni dello sviluppo neuronale e a processi rilevanti per i tumori, rendendola un nodo utile per studiare l’adattamento allo stress e lo squilibrio della proteostasi nelle cellule umane. In quanto regolatore dell’autofagia con ampia connettività tra vie di segnalazione, AMBRA1 viene frequentemente analizzata in modelli di neurobiologia, metabolismo e segnalazione nelle cellule tumorali.
AMBRA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AMBRA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AMBRA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AMBRA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AMBRA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.