AMBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419097

Panoramica

Ambp codifica la proteina precursore AMBP, che viene processata proteoliticamente per generare alfa-1-microglobulina e la catena pesante 4 dell’inibitore inter-alfa-tripsina (ITIH4). L’alfa-1-microglobulina funziona come scavenger legante l’eme e redox-attivo, contribuendo a limitare lo stress ossidativo e carbonilico, mentre ITIH4 è associata alle dinamiche della matrice extracellulare e alle risposte infiammatorie di fase acuta. Nella biologia del topo, i prodotti derivati da AMBP sono comunemente studiati nel contesto della segnalazione sistemica di stress, delle reti di proteine secrete arricchite nel fegato e del rimodellamento legato a proteasi/infiammazione. La disregolazione di queste vie è rilevante per la ricerca su infiammazione, danno tissutale e fenotipi associati allo stress ossidativo, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AMBP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ambp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ambp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ambp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AMBP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ambp per lo studio della segnalazione di AMBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ambp critici per la funzione di AMBP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ambp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ambp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AMBP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AMBP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ambp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ambp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.