AMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419097

Übersicht

Ambp kodiert das AMBP-Vorläuferprotein, das proteolytisch verarbeitet wird und dabei Alpha-1-Mikroglobulin sowie die schwere Kette 4 des Inter-Alpha-Trypsin-Inhibitors (ITIH4) hervorbringt. Alpha-1-Mikroglobulin wirkt als häm-bindender, redoxaktiver Scavenger, der dazu beiträgt, oxidativen und Carbonyl-Stress zu begrenzen, während ITIH4 mit der Dynamik der extrazellulären Matrix und Akutphasen-Entzündungsreaktionen assoziiert ist. In der Mausbiologie werden AMBP-abgeleitete Produkte häufig im Kontext systemischer Stresssignalgebung, leberangereicherter sekretierter Proteinnetzwerke sowie protease-/entzündungsgekoppelter Remodelling-Prozesse untersucht. Eine Fehlregulation dieser Signalwege ist für die Forschung zu Entzündung, Gewebeschädigung und oxidativem Stress assoziierten Phänotypen relevant, ohne dabei klinische Ergebnisse zu implizieren.

Das AMBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ambp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ambp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ambp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AMBP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ambp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AMBP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ambp-Exone abzielen, die für die AMBP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ambp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AMBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AMBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ambp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AMBP HDR-Plasmid (m) und AMBP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ambp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ambp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.