ALX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419094

Panoramica

Alx3 codifica il fattore di trascrizione omeobox ALX3, un regolatore nucleare necessario per il patterning craniofacciale e della regione anteriore della testa durante l’embriogenesi. ALX3 influenza i programmi di espressione genica che controllano la specificazione delle cellule della cresta neurale, la differenziazione mesenchimale e i processi morfogenetici che modellano le strutture craniofacciali. Attraverso il suo homeodominio di legame al DNA, ALX3 integra segnali di sviluppo per coordinare reti trascrizionali ristrette a specifiche linee cellulari. Un’attività deregolata della famiglia ALX è stata associata ad anomalie craniofacciali congenite, rendendo Alx3 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della regolazione genica nello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALX3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Alx3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Alx3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Alx3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALX3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Alx3 per lo studio della segnalazione di ALX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Alx3 critici per la funzione di ALX3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Alx3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ALX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Alx3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALX3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ALX3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Alx3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Alx3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.