Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALX3 (m): sc-419094

Présentation

Alx3 code le facteur de transcription homéobox ALX3, un régulateur nucléaire indispensable à la mise en place du crâne et de la région antérieure de la tête au cours de l’embryogenèse. ALX3 influence des programmes d’expression génique qui contrôlent la spécification des cellules de la crête neurale, la différenciation mésenchymateuse et les processus morphogénétiques qui façonnent les structures craniofaciales. Grâce à son homéodomaine de liaison à l’ADN, ALX3 intègre des signaux du développement afin de coordonner des réseaux transcriptionnels restreints à des lignages. Une activité dérégulée de la famille ALX a été associée à des anomalies craniofaciales congénitales, ce qui fait d’Alx3 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation génique du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALX3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Alx3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Alx3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Alx3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALX3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Alx3 pour l'étude de la signalisation de ALX3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Alx3 essentiels à la fonction de ALX3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Alx3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ALX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Alx3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALX3 plasmide HDR (m) et le ALX3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Alx3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Alx3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.