ALR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403367

Panoramica

Il gene umano **GFER** codifica l’**augmenter of liver regeneration** (ALR), una ossidasi sulfidrilica FAD-dipendente localizzata principalmente nello spazio intermembrana mitocondriale, che supporta il ripiegamento ossidativo delle proteine e la biogenesi mitocondriale. ALR agisce all’interno della navetta di disolfuri **MIA40/ERV1 (CHCHD4/GFER)** per importare e maturare proteine ricche di cisteina, influenzando così l’integrità della catena respiratoria, l’omeostasi redox e i programmi cellulari di sopravvivenza. Attraverso questi ruoli, ALR incide su processi quali il metabolismo energetico, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e le risposte allo stress, che risultano spesso alterati nella disfunzione metabolica e nel rimodellamento mitocondriale associato ai tumori. La disregolazione di GFER/ALR è stata associata a fenotipi di malattie mitocondriali e a patologie più ampie legate a un’importazione proteica compromessa e a una ridotta capacità di ripiegamento ossidativo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GFER in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GFER insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GFER a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GFER per lo studio della segnalazione di ALR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GFER critici per la funzione di ALR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GFER per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ALR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GFER. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ALR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GFER per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GFER definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.