alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Plasmide Double Nickase (h): sc-402561-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double Nickase Plasmid (h) e il alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP1A4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402561-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402561-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP1A4 codifica la subunità catalitica alfa 4 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un’ATPasi di tipo P che mantiene i gradienti transmembrana di Na⁺ e K⁺ essenziali per il potenziale di membrana, l’equilibrio osmotico e il trasporto attivo secondario. Accoppiando l’idrolisi dell’ATP allo scambio ionico, ATP1A4 influenza la segnalazione intracellulare legata all’omeostasi ionica, all’eccitabilità cellulare e ai processi di trasporto epiteliale. Un’alterata attività della Na⁺/K⁺-ATPasi può modulare vie che coinvolgono la gestione del calcio e la segnalazione chinasi a valle, offrendo un punto di accesso meccanicistico per studiare le risposte allo stress e la regolazione della fisiologia cellulare dipendente dagli ioni. Sebbene ATP1A4 sia nota soprattutto per i ruoli nella biologia riproduttiva, la sua funzione di pompaggio ionico supporta indagini più ampie su come le subunità della pompa contribuiscano alla fisiologia specifica dei tessuti e a fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.
alpha 4 Sodium Potassium ATPase/ATP1A4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP1A4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP1A4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP1A4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP1A4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.