alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416366

Panoramica

ATP1A3 codifica la subunità catalitica alfa 3 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un’ATPasi di tipo P della membrana plasmatica che utilizza l’idrolisi di ATP per mantenere i gradienti transmembrana di Na⁺ e K⁺. Modellando il potenziale di membrana a riposo, il recupero del potenziale d’azione e il trasporto secondario, ATP1A3 influenza l’eccitabilità neuronale, l’omeostasi ionica e l’accoppiamento energetico nei tessuti eccitabili. La sua attività è integrata con processi quali la trasmissione sinaptica, la regolazione del calcio e le risposte allo stress cellulare che dipendono dai gradienti elettrochimici. Alterazioni genetiche e funzionali di ATP1A3 sono associate a fenotipi di malattie neurologiche, rendendolo un nodo utile per indagare i meccanismi della neurofisiologia e della disfunzione del trasporto ionico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATP1A3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATP1A3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATP1A3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATP1A3 per lo studio della segnalazione di alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATP1A3 critici per la funzione di alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATP1A3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATP1A3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATP1A3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATP1A3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.