alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401939-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Double Nickase Plasmid (h) e il alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP1A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401939-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401939-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP1A2 codifica la subunità catalitica alfa-2 della Na⁺/K⁺-ATPasi, una ATPasi di tipo P della membrana plasmatica che mantiene i gradienti di Na⁺ e K⁺ tramite l’idrolisi dell’ATP. Sostenendo il potenziale di membrana a riposo e l’omeostasi ionica, ATP1A2 influenza l’eccitabilità neuronale e gliale, il trasporto attivo secondario e l’equilibrio osmotico, con effetti a valle sulla gestione del Ca²⁺ attraverso lo scambiatore Na⁺/Ca²⁺. La proteina contribuisce a processi che includono il recupero del potenziale d’azione, la rimozione dei neurotrasmettitori negli astrociti e la regolazione del volume cellulare. Alterazioni genetiche e funzionali di ATP1A2 sono state associate a fenotipi neurologici come l’emicrania emiplegica familiare e una maggiore suscettibilità alle crisi epilettiche, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla disregolazione dell’eccitabilità e del trasporto ionico.
alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP1A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP1A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP1A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP1A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.