alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401939

Panoramica

ATP1A2 codifica la subunità catalitica α2 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un’ATPasi di tipo P della membrana plasmatica che mantiene i gradienti intracellulari di Na⁺ e K⁺ accoppiando l’idrolisi dell’ATP al trasporto di ioni. Questo gradiente elettrochimico sostiene il potenziale di membrana, l’equilibrio osmotico, il trasporto attivo secondario e l’omeostasi del Ca²⁺ tramite lo scambiatore Na⁺/Ca²⁺, influenzando così l’eccitabilità e la segnalazione nei tessuti elettricamente attivi. L’attività di ATP1A2 si intreccia con vie che regolano il buffering ionico neuronale e gliale, la trasmissione sinaptica e le risposte cellulari allo stress dovuto a squilibrio ionico. Alterazioni genetiche e funzionali di ATP1A2 sono associate a fenotipi neurologici, tra cui l’emicrania emiplegica familiare e manifestazioni correlate con crisi/atassia, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici dei disturbi dell’eccitabilità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATP1A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATP1A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATP1A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATP1A2 per lo studio della segnalazione di alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATP1A2 critici per la funzione di alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATP1A2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATP1A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATP1A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATP1A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.