alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400239-NIC

ATP1A1 codifica a subunidade catalítica α1 da Na⁺/K⁺-ATPase, uma ATPase do tipo P essencial que utiliza a hidrólise de ATP para exportar Na⁺ e importar K⁺ através da membrana plasmática. Ao manter gradientes iónicos, o ATP1A1 sustenta o potencial de membrana em repouso, o controlo do volume celular, o transporte ativo secundário e a excitabilidade, além de influenciar vias de sinalização associadas à adesão, à organização do citoesqueleto e às respostas ao stress. A atividade da Na⁺/K⁺-ATPase α1 é central para a fisiologia epitelial e neuronal e contribui para programas de homeostase iónica que moldam a exigência metabólica e o manuseamento de Ca²⁺. A desregulação da função ou da expressão de ATP1A1 tem sido associada a fenótipos alterados de excitabilidade e de transporte em contextos relevantes para doenças, tornando-o um ponto útil para estudar a fisiologia de membranas e o crosstalk de sinalização.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATP1A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATP1A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATP1A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATP1A1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.