alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400239-NIC

ATP1A1 codifica la subunità catalitica α1 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un'ATPasi di tipo P essenziale che utilizza l'idrolisi dell'ATP per esportare Na⁺ e importare K⁺ attraverso la membrana plasmatica. Mantenendo i gradienti ionici, ATP1A1 sostiene il potenziale di membrana a riposo, il controllo del volume cellulare, il trasporto attivo secondario e l'eccitabilità, e influenza vie di segnalazione legate all'adesione, all'organizzazione del citoscheletro e alle risposte allo stress. L'attività della Na⁺/K⁺-ATPasi α1 è centrale per la fisiologia epiteliale e neuronale e contribuisce a programmi di omeostasi ionica che modellano la richiesta metabolica e la gestione del Ca²⁺. Una funzione o un'espressione deregolata di ATP1A1 è stata associata a un'eccitabilità alterata e a fenotipi di trasporto in contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studiare la fisiologia di membrana e il cross-talk della segnalazione.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP1A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP1A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP1A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP1A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.