ALKBH5 Plasmide Double Nickase (m): sc-435243-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALKBH5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALKBH5 Double Nickase Plasmid (m) e il ALKBH5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Alkbh5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALKBH5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435243-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALKBH5 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-435243-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse **Alkbh5** codifica **ALKBH5**, una diossigenasi dipendente da **Fe(II)/2-ossoglutarato** che agisce come demetilasi dell’**N6-metiladenosina (m6A)** dell’RNA, modulando lo splicing, l’esportazione, la stabilità e la traduzione degli mRNA. Modellando dinamicamente il panorama epitranscrittomico, ALKBH5 influenza programmi di espressione genica legati alle decisioni sul destino cellulare, alle risposte allo stress e ai processi di sviluppo. L’attività di ALKBH5 si interseca con le vie dei “writer” e dei “reader” dell’m6A per regolare esiti specifici a livello di singolo trascritto e le reti di segnalazione a valle. Una metilazione dell’RNA mediata da ALKBH5 deregolata è stata associata ad alterazioni dei fenotipi di proliferazione e differenziamento in contesti cellulari rilevanti per la patologia, a supporto del suo impiego come nodo per studi meccanicistici sulla biologia delle modificazioni dell’RNA.
ALKBH5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Alkbh5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Alkbh5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Alkbh5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Alkbh5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.