ALKBH3 Plasmide Double Nickase (h): sc-406896-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALKBH3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALKBH3 Double Nickase Plasmid (h) e il ALKBH3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALKBH3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ALKBH3 Antibody (B-7): sc-376520
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALKBH3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406896-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALKBH3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406896-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALKBH3 (AlkB omologo 3) è una diossigenasi umana dipendente da Fe(II)/2-ossoglutarato che catalizza la demetilazione ossidativa di acidi nucleici alchilati, contribuendo alla riparazione di lesioni come la 1-metiladenina e la 3-metilcitosina nel DNA e nell’RNA. Questa attività sostiene il mantenimento del genoma e il controllo qualità dell’RNA, intersecandosi con le vie di risposta al danno al DNA e con lo stress associato alla replicazione. Un’espressione deregolata di ALKBH3 e un’alterata capacità di riparazione dei danni da alchilazione sono state riportate in molteplici contesti legati al cancro, nei quali la dipendenza dalla riparazione degli acidi nucleici e dalla fedeltà trascrizionale può influenzare i fenotipi proliferativi. Di conseguenza, ALKBH3 è spesso studiato nei meccanismi di tolleranza al danno da alchilazione, nell’instabilità associata a R-loop e alla trascrizione, e nelle risposte cellulari a stressori genotossici.
ALKBH3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALKBH3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALKBH3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALKBH3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALKBH3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.