Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ALK Plasmide Double Nickase (h): sc-400460-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALK Double Nickase Plasmid (h) e il ALK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ALK Antibody (F-12): sc-398791
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALK Plasmide Double Nickase (h) | sc-400460-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400460-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La chinasi del linfoma anaplastico (ALK) è una tirosina chinasi recettoriale che regola proliferazione, sopravvivenza e differenziazione cellulari attraverso una segnalazione dipendente dalla fosforilazione. In seguito al legame con il ligando o ad attivazione aberrante, ALK può connettersi a vie a valle tra cui RAS–MAPK, PI3K–AKT e JAK–STAT, influenzando programmi trascrizionali e la dinamica del citoscheletro. Nella biologia umana, l'attività di ALK è strettamente controllata durante lo sviluppo, in particolare nelle linee neuronali, e la sua deregolazione può rimodellare le reti di segnalazione dei fattori di crescita. L'alterazione dell'espressione di ALK o riarrangiamenti genomici attivanti sono ampiamente studiati come driver oncogenici che perturbano la segnalazione chinasi e il controllo dello stato cellulare.
ALK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.