Alix Plasmide Double Nickase (h): sc-400350-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Alix Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Alix Double Nickase Plasmid (h) e il Alix Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PDCD6IP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Alix Antibody (1A12): sc-53540
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Alix Plasmide Double Nickase (h) | sc-400350-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Alix Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400350-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDCD6IP codifica Alix, una proteina adattatrice associata a ESCRT che coordina eventi di rimodellamento di membrana, tra cui la biogenesi dei corpi multivescicolari, lo smistamento del carico endosomiale e la biogenesi degli esosomi. Alix interagisce con componenti di ESCRT-I/III e con partner come TSG101 e CHMP4 per supportare l’abscissione durante la citocinesi, la riparazione della membrana plasmatica e la downregolazione dei recettori, collegandola agli output di segnalazione di fattori di crescita e del sistema immunitario. Grazie ai suoi ruoli nel traffico endolisosomiale e nei processi di gemmazione, Alix è spesso studiata nel contesto dell’egresso virale, delle dinamiche di membrana legate all’autofagia e dell’omeostasi neuronale. La deregolazione del traffico dipendente da PDCD6IP è stata associata ad alterazioni della segnalazione mediata da vescicole extracellulari e delle vie della proteostasi, rilevanti per la biologia del cancro, la neurodegenerazione e gli stati infiammatori.
Alix Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDCD6IP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDCD6IP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDCD6IP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDCD6IP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.