ALG2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410220

Panoramica

ALG2 codifica la mannosiltransferasi 2 alfa-1,3/1,6, un enzima chiave del pathway di glicosilazione N-linked nel reticolo endoplasmatico, che estende gli intermedi oligosaccaridici legati a lipidi durante le fasi iniziali dell’assemblaggio dei glicani. Supportando il corretto ripiegamento proteico, il controllo qualità e il traffico lungo la via secretoria, ALG2 influenza l’omeostasi del RE e le reti di proteostasi. L’alterazione delle tappe della N-glicosilazione può perturbare la maturazione delle proteine di membrana e secrete, inducendo stress del RE e modifiche nella segnalazione cellulare. Varianti che compromettono la funzione di ALG2 sono state associate a disturbi congeniti della glicosilazione, collegando questo enzima a effetti a livello sistemico sullo sviluppo e sulla fisiologia cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALG2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALG2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALG2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALG2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALG2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALG2 per lo studio della segnalazione di ALG2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALG2 critici per la funzione di ALG2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALG2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALG2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ALG2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALG2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALG2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ALG2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALG2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALG2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.