ALDH1L2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406648

Panoramica

ALDH1L2 codifica una aldeide deidrogenasi mitocondriale che funziona come 10-formiltetraidrofolato deidrogenasi, supportando il metabolismo dei folati a un carbonio e l’omeostasi redox all’interno dei mitocondri. Regolando il turnover del formil-THF e le reazioni legate a NADP(H), ALDH1L2 influenza la capacità di biosintesi dei nucleotidi, l’equilibrio ossidativo mitocondriale e le risposte cellulari allo stress metabolico. La perturbazione del flusso mitocondriale a un carbonio può rimodellare le esigenze anaboliche e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, processi spesso alterati in stati cellulari proliferativi e adattati allo stress. Di conseguenza, ALDH1L2 viene studiato nel contesto della riprogrammazione metabolica, della funzione mitocondriale e dei cambiamenti associati a malattie nelle vie dipendenti dai folati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALDH1L2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALDH1L2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALDH1L2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALDH1L2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALDH1L2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALDH1L2 per lo studio della segnalazione di ALDH1L2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALDH1L2 critici per la funzione di ALDH1L2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALDH1L2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALDH1L2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALDH1L2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ALDH1L2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALDH1L2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALDH1L2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.