Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406757

Panoramica

ALDH5A1 codifica la succinico semialdeide deidrogenasi (SSADH), un enzima mitocondriale NAD+-dipendente che catalizza l’ossidazione della succinico semialdeide a succinato, collegando il catabolismo del GABA al ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Controllando il flusso attraverso lo shunt del GABA, ALDH5A1 contribuisce a regolare l’equilibrio redox cellulare, il metabolismo mitocondriale e il turnover dei neurotrasmettitori nei tessuti neurali. L’alterazione dell’attività della SSADH è associata all’accumulo di metaboliti derivati dal GABA e a una modificazione della segnalazione inibitoria; inoltre, ALDH5A1 è stato studiato nel contesto degli errori congeniti del metabolismo che colpiscono il sistema nervoso. Queste caratteristiche rendono ALDH5A1 un bersaglio utile per analizzare il crosstalk metabolico tra funzione mitocondriale e vie dei neurotrasmettitori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALDH5A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALDH5A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALDH5A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALDH5A1 per lo studio della segnalazione di Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALDH5A1 critici per la funzione di Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALDH5A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALDH5A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALDH5A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALDH5A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.