Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431814

Visão geral

Aldh4a1 de camundongo codifica a aldeído desidrogenase 4-A1 (P5CDH/ALDH4A1), uma enzima mitocondrial que catalisa a conversão de Δ1-pirrolina-5-carboxilato em glutamato nas etapas finais do catabolismo de prolina e hidroxiprolina. Ao controlar o fluxo entre o metabolismo da prolina, a produção de glutamato e o equilíbrio redox mitocondrial, a ALDH4A1 influencia a homeostase de aminoácidos e a desintoxicação de aldeídos reativos. A perturbação dessa via está associada a alterações no manejo do estresse oxidativo e à disfunção mitocondrial, tornando Aldh4a1 um nó útil para estudar respostas ao estresse metabólico. A atividade da ALDH4A1 também se conecta a processos mais amplos de detecção de nutrientes e anaplerose por meio da entrada dependente de glutamato no ciclo do TCA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Aldh4a1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Aldh4a1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Aldh4a1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Aldh4a1 para a investigação da sinalização de Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Aldh4a1 críticos para a função Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Aldh4a1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Aldh4a1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Aldh4a1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Aldh4a1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.