ALB/Albumin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400269-LAC

L’ALB umano codifica l’albumina, la proteina plasmatica più abbondante sintetizzata dagli epatociti, essenziale per mantenere la pressione oncotica e per tamponare la distribuzione dei fluidi extracellulari. L’albumina si lega e trasporta acidi grassi, bilirubina, ormoni steroidei e un’ampia gamma di xenobiotici, sostenendo l’omeostasi metabolica epatica e la distribuzione sistemica dei nutrienti. L’espressione di ALB è strettamente associata alla differenziazione degli epatociti e a programmi trascrizionali specifici del fegato, inclusi network regolati da HNF e C/EBP che coordinano la gestione dei lipidi, la detossificazione e la funzione secretoria. La produzione deregolata di albumina è ampiamente utilizzata come indicatore molecolare di compromissione della capacità sintetica epatica e di alterata fisiologia del fegato in diversi contesti di ricerca su danno epatico e malattie metaboliche.

Le particelle di attivazione lentivirale ALB/Albumin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ALB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ALB/Albumin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ALB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ALB/Albumin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ALB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.