AIP5 Plasmide Double Nickase (h): sc-403772-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AIP5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AIP5 Double Nickase Plasmid (h) e il AIP5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WWP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AIP5 Antibody (F-3): sc-390897
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AIP5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403772-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AIP5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403772-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WWP1 codifica l’E3 ubiquitina‑ligasi umana AIP5, un enzima con dominio HECT che ubiquitina diversi substrati per regolare la stabilità proteica, il traffico intracellulare e l’intensità dei segnali. Attraverso il riconoscimento dei motivi PPxY tramite i suoi domini WW, AIP5 contribuisce a modulare vie che controllano la crescita cellulare, la polarità e le risposte allo stress, includendo la modulazione della segnalazione prossimale ai recettori e il turnover di proteine regolatorie. Un’attività deregolata di WWP1/AIP5 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi dell’ubiquitina e a programmi di segnalazione aberranti implicati nella trasformazione oncogena e in fenotipi dello sviluppo. Di conseguenza, WWP1 è spesso studiato per chiarire come la proteostasi mediata dall’ubiquitina si intrecci con proliferazione, migrazione e riconfigurazione delle vie di segnalazione nelle cellule umane.
AIP5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WWP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WWP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WWP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WWP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.