AICAR Plasmide Double Nickase (h): sc-404771-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AICAR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AICAR Double Nickase Plasmid (h) e il AICAR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATIC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AICAR transformylase Antibody (F38 P7 H9): sc-53612
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AICAR Plasmide Double Nickase (h) | sc-404771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AICAR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina interagente con la deaminasi dell’adenosina monofosfato codificata dal gene umano ATIC (AICAR transformilasi/IMP cicloidrolasi) è un enzima bifunzionale che catalizza le ultime due fasi della biosintesi de novo delle purine, convertendo l’AICAR in IMP grazie alle attività di transformilasi del ribonucleotide 5-amminoimidazolo-4-carbossammide e di cicloidrolasi dell’IMP. Controllando la produzione di IMP, ATIC contribuisce a mantenere i pool di nucleotidi necessari per la sintesi di DNA/RNA e sostiene l’omeostasi energetica nelle cellule in proliferazione. L’attività di ATIC si interseca con il metabolismo a un carbonio/dipendente dai folati tramite la sua reazione di formiltransferasi, collegando la sintesi delle purine alla disponibilità di gruppi metilici e all’equilibrio redox. La disregolazione delle vie delle purine e dei folati è spesso studiata nel contesto dello stress metabolico, della stabilità genomica e dei programmi di proliferazione alterati, rilevanti per la biologia del cancro e per la ricerca sugli errori congeniti del metabolismo delle purine.
AICAR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATIC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATIC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATIC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATIC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.