AHRR Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-412812-LAC

L’AHRR umano (aryl-hydrocarbon receptor repressor) codifica un repressore trascrizionale inducibile da ligandi che esercita un controllo di feedback negativo sull’espressione genica dipendente da AHR. AHRR compete con AHR per ARNT e si lega agli elementi di risposta agli xenobiotici per attenuare la trascrizione dei programmi di detossificazione e risposta allo stress, modulando le risposte cellulari ai ligandi ambientali e ai metaboliti endogeni. Attraverso la modulazione delle reti enzimatiche del CYP, della segnalazione dello stress ossidativo e della regolazione dei geni infiammatori, AHRR influenza la funzione di barriera epiteliale, la polarizzazione immunitaria e l’omeostasi metabolica. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di AHRR sono state associate a una segnalazione xenobiotica deregolata e vengono spesso studiate in contesti quali la cancerogenesi, le patologie delle vie aeree e l’infiammazione immunomediata.

Le particelle di attivazione lentivirale AHRR (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AHRR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale AHRR (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AHRR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di AHRR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AHRR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.