Ah Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400297-ACT

AHR (recettore degli idrocarburi arilici) codifica il recettore Ah, un fattore di trascrizione bHLH-PAS attivato da ligando che integra segnali ambientali ed endogeni di piccole molecole per riprogrammare l’espressione genica. Una volta attivato, AHR trasloca nel nucleo, dimerizza con ARNT e si lega agli elementi di risposta agli xenobiotici per indurre programmi di detossificazione, inclusi CYP1A1/1B1, intersecando inoltre le vie di NF-κB, della segnalazione dell’ipossia e del controllo del ciclo cellulare. La segnalazione di AHR modella la biologia della barriera epiteliale, le risposte allo stress ossidativo e la differenziazione immunitaria, influenzando percorsi rilevanti per l’infiammazione e la biologia tumorale. Un’attività di AHR deregolata è stata associata ad alterazioni del metabolismo degli xenobiotici, a squilibri immunitari e a effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e migrazione.

Ah Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AHR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ah Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AHR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AHR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ah Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AHR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ah Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ah Receptor nelle cellule tumorali con espressione di AHR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.