AGXT Plasmide Double Nickase (h): sc-407697-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AGXT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AGXT Double Nickase Plasmid (h) e il AGXT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AGXT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AGXT Antibody (173J2B): sc-517624
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AGXT Plasmide Double Nickase (h) | sc-407697-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGXT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407697-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGXT umano codifica l’alanina–gliossilato aminotransferasi, un enzima perossisomiale dipendente dal PLP che catalizza la transaminazione del gliossilato a glicina utilizzando l’alanina come donatore di gruppi amminici. Questa attività è centrale nella detossificazione epatica del gliossilato e collega il metabolismo degli amminoacidi all’omeostasi dei perossisomi, limitando la conversione del gliossilato in ossalato. L’alterazione della funzione di AGXT è associata all’iperossaluria primaria di tipo 1, caratterizzata da un’aumentata produzione di ossalato e dalla deposizione di ossalato di calcio, rendendo AGXT un nodo chiave per lo studio del controllo metabolico perossisomiale. AGXT funge inoltre da gene modello per indagare il targeting subcellulare, la dipendenza dell’enzima dai cofattori e le risposte allo stress metabolico nelle cellule umane.
AGXT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGXT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGXT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGXT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGXT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.