AGTPBP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405311-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AGTPBP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AGTPBP1 Double Nickase Plasmid (h) e il AGTPBP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AGTPBP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AGTPBP1 Antibody (LM-1A7): sc-134251
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AGTPBP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405311-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGTPBP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405311-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGTPBP1 codifica la carbossipeptidasi citosolica 1 (CCP1), una deglutamilasi che accorcia le catene laterali di poliglutammato sulla tubulina e su altri substrati per regolare la stabilità dei microtubuli e il trasporto dipendente dai motori. Attraverso il controllo delle modifiche post-traduzionali della tubulina, AGTPBP1 influenza l’organizzazione del citoscheletro, il mantenimento dei prolungamenti neuronali e le vie di traffico associate alle ciglia. Un’alterazione dell’attività di AGTPBP1 perturba le dinamiche dipendenti dai microtubuli e può compromettere la proteostasi e la distribuzione degli organelli nelle cellule differenziate. Le alterazioni genetiche in AGTPBP1 sono associate a fenotipi di tipo neuroevolutivo e neurodegenerativo, a supporto della sua utilità come bersaglio per lo studio dell’integrità neuronale e della regolazione del citoscheletro.
AGTPBP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGTPBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGTPBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGTPBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGTPBP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.