AGS3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402802-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AGS3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AGS3 Double-Nickase-Plasmid (h) und AGS3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPSM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AGS3: sc-271721
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AGS3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGS3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPSM1 kodiert den Aktivator der G‑Protein‑Signalübertragung 3 (AGS3), einen multidomänigen Regulator, der an Gαi/o‑Untereinheiten bindet und den Zyklus heterotrimerer G‑Proteine unabhängig von der klassischen GPCR‑Aktivierung moduliert. Über seine TPR‑ sowie GPR/GoLoco‑Motive dient AGS3 als Gerüstprotein für Signalkomplexe, die die Rezeptordesensibilisierung, den Vesikeltransport und polarisationsassoziierte Prozesse beeinflussen, und integriert dabei Signale aus cAMP/PKA‑ und kleinen GTPase‑Netzwerken. Die AGS3‑Aktivität wurde mit der Kontrolle von Zellmigration und Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht, und veränderte GPSM1‑Expression bzw. ein verschobenes Signalgleichgewicht wurde in neurobiologischen Zusammenhängen sowie bei tumorassoziierter Neuverdrahtung von Signalwegen beschrieben. Diese Eigenschaften machen GPSM1 zu einem nützlichen Ziel, um das Crosstalk G‑proteinregulierter Signalwege zu untersuchen und nachgeschaltete Effektoren zu identifizieren, die den zellulären Zustand prägen.
AGS3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPSM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPSM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPSM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPSM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.