Plásmido CRISPR de Activación (h) AGR2: sc-403036-ACT

Anterior gradient 2 (AGR2) es un factor humano similar a una isomerasa de disulfuro de proteínas del retículo endoplásmico (RE) que favorece el plegamiento de proteínas secretoras y la proteostasis mediante interacciones con redes de chaperonas del RE. AGR2 contribuye a la regulación de la diferenciación epitelial, la producción de mucinas y el mantenimiento de la homeostasis del RE, vinculando su actividad con la señalización de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR) y con procesos de control de calidad dependientes del estado redox. La expresión alterada de AGR2 se ha asociado con la biología de tumores epiteliales, incluidos cambios en la adhesión celular, la migración y los fenotipos secretores, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar programas de adaptación al estrés y de diferenciación en modelos relevantes para el cáncer. Estas funciones también sitúan a AGR2 como una lectura mecanística en estudios de estrés del RE, tráfico de proteínas y estados de linaje epitelial.

AGR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AGR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AGR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AGR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AGR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AGR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AGR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AGR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AGR2 en células tumorales con expresión de AGR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.