aggrecan Plasmide Double Nickase (h): sc-400760-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- aggrecan Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il aggrecan Double Nickase Plasmid (h) e il aggrecan Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACAN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: aggrecan Antibody (4F4): sc-33695
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
aggrecan Plasmide Double Nickase (h) | sc-400760-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
aggrecan Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400760-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACAN codifica l’aggrecan, un importante proteoglicano a condroitin solfato della matrice extracellulare della cartilagine che si lega all’acido ialuronico e alla proteina di collegamento (link protein) per formare grandi aggregati che conferiscono resistenza alla compressione. La sintesi, la secrezione e il turnover dell’aggrecan sono parte integrante dei programmi di differenziamento dei condrociti e dell’omeostasi della matrice, interagendo con vie che regolano l’assemblaggio e il rimodellamento della matrice extracellulare, inclusi i segnali anabolici e la clivazione mediata da proteasi delle famiglie ADAMTS e MMP. Alterazioni dell’espressione di ACAN o dell’integrità dell’aggrecan modificano la biomeccanica della cartilagine e l’organizzazione della matrice, contribuendo a fenotipi scheletrici degenerativi e dello sviluppo. Queste caratteristiche rendono ACAN un bersaglio centrale per lo studio della biologia della cartilagine, del crosstalk tra segnali della matrice extracellulare e dei meccanismi di degradazione della matrice.
aggrecan Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACAN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACAN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACAN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACAN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.