AFF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406238

Panoramica

AFF4 (membro 4 della famiglia AFF4/AF4/FMR2) codifica un regolatore trascrizionale nucleare che funge da componente centrale del Super Elongation Complex (SEC), coordinando la transizione della RNA polimerasi II verso un’elongazione produttiva. Attraverso interazioni con fattori di elongazione come P-TEFb e le proteine ELL, AFF4 supporta la rapida induzione di geni responsivi agli stimoli e influenza programmi trascrizionali associati alla cromatina. Il controllo dell’elongazione trascrizionale dipendente da AFF4 contribuisce alla regolazione dell’identità cellulare, della proliferazione e delle vie di risposta allo stress. Un’attività del SEC deregolata e un’alterazione dei circuiti trascrizionali associati ad AFF4 sono rilevanti per programmi di espressione genica oncogenici e per altre malattie guidate da un’elongazione aberrante della RNA polimerasi II.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AFF4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AFF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AFF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AFF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AFF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AFF4 per lo studio della segnalazione di AFF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AFF4 critici per la funzione di AFF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AFF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AFF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AFF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AFF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AFF4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AFF4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AFF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AFF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.