Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418999

Panoramica

Adcy9 codifica l’adenilato ciclasi 9 (AC9/ADCY9), un enzima associato alla membrana che converte l’ATP in cAMP in risposta alla segnalazione mediata da GPCR, modellando la dinamica compartimentalizzata dei secondi messaggeri. Il cAMP derivato da AC9 regola la proteina chinasi A e vie dipendenti da EPAC, che influenzano reti di fosforilazione, trascrizione genica, trasporto ionico e adattamento metabolico. Nelle cellule di topo, l’attività di ADCY9 contribuisce a output di segnalazione specifici per stimolo e al cross-talk con processi mediati dal calcio e dalle proteine G. La deregolazione della segnalazione del cAMP e l’alterata funzione di ADCY9 sono state associate a fenotipi rilevanti per la regolazione cardiometabolica, la biologia delle vie aeree e i circuiti neurocomportamentali, rendendo Adcy9 un nodo utile per studi meccanicistici sulla trasduzione del segnale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adcy9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adcy9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adcy9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adcy9 per lo studio della segnalazione di Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adcy9 critici per la funzione di Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adcy9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adcy9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adcy9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adcy9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.