Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418996

Panoramica

Adcy6 codifica l’adenilato ciclasi 6 (AC6/ADCY6), un enzima associato alla membrana che converte l’ATP in cAMP a valle della segnalazione mediata da recettori accoppiati a proteine G. Modulando la dinamica del cAMP, AC6 regola programmi di fosforilazione dipendenti da PKA ed EPAC che influenzano l’attività dei canali ionici, il controllo metabolico e le risposte trascrizionali dipendenti dallo stimolo. Nei tessuti murini, ADCY6 è comunemente collegato a vie β-adrenergiche e ad altri pathway accoppiati a Gs che coordinano la contrattilità cardiaca, il tono della muscolatura liscia delle vie aeree e la gestione renale di sale e acqua. Una segnalazione del cAMP deregolata che coinvolge ADCY6 è stata associata a fenotipi rilevanti per apparato cardiopolmonare e reni, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sull’integrazione dei segnali dei GPCR e sull’omeostasi dei secondi messaggeri.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adcy6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adcy6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adcy6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adcy6 per lo studio della segnalazione di Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adcy6 critici per la funzione di Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adcy6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adcy6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adcy6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adcy6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.