Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400407-KO-2

Panoramica

ADCY3 codifica l’adenilato ciclasi 3 (AC3), un enzima associato alla membrana che converte l’ATP in AMP ciclico, modulando così la segnalazione di secondi messaggeri a valle di diversi recettori accoppiati a proteine G (GPCR). Regolando i livelli intracellulari di cAMP, AC3 influenza le vie dipendenti da PKA ed EPAC che controllano programmi trascrizionali, l’attività dei canali ionici e le risposte metaboliche cellulari. AC3 è ampiamente studiata in contesti sensoriali e neuroendocrini e contribuisce alla segnalazione in microdomini di cAMP che affina l’accoppiamento stimolo–risposta. Evidenze genetiche e funzionali collegano la segnalazione associata ad ADCY3 a fenotipi metabolici e tratti neurocomportamentali, rendendola rilevante per studi meccanicistici della regolazione guidata dal cAMP nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADCY3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADCY3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADCY3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADCY3 per lo studio della segnalazione di Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADCY3 critici per la funzione di Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADCY3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADCY3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADCY3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADCY3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.