Adenosine A2A-R Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400807-LAC

ADORA2A codifica il recettore umano dell’adenosina A2A (A2A-R), un recettore accoppiato a proteine G che segnala principalmente attraverso Gs per aumentare i livelli di cAMP e attivare programmi trascrizionali dipendenti da PKA e CREB. A2A-R integra i segnali extracellulari dell’adenosina con circuiti neuromodulatori e immunoregolatori, influenzando processi quali il rilascio di neurotrasmettitori, la plasticità sinaptica e la produzione di mediatori dell’infiammazione. L’attività del recettore interseca le vie di segnalazione MAPK/ERK, l’omeostasi del calcio e la regolazione delle reti di citochine, collegando l’espressione di ADORA2A alle risposte allo stress e ai cambiamenti del microambiente tissutale. La disregolazione della segnalazione di ADORA2A è stata studiata in contesti quali neuroinfiammazione, neurodegenerazione e soppressione immunitaria associata ai tumori, rendendola rilevante per la mappatura delle vie di segnalazione e la validazione meccanicistica dei bersagli in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale Adenosine A2A-R (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ADORA2A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Adenosine A2A-R (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ADORA2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Adenosine A2A-R. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ADORA2A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.