Adenosine A2A-R Plasmide Double Nickase (h): sc-400807-NIC

ADORA2A codifica il recettore umano dell'adenosina A2A (Adenosine A2A-R), un GPCR accoppiato a Gs che aumenta i livelli intracellulari di cAMP e attiva la trascrizione dipendente da PKA/CREB in risposta all'adenosina extracellulare. Questo asse di segnalazione modula la neurotrasmissione, la vasodilatazione e la funzione delle cellule immunitarie, integrando i segnali di stress metabolico nelle risposte cellulari. A2A-R interagisce (cross-talk) con le vie dopaminergiche e glutamatergiche e modella la segnalazione infiammatoria attraverso la regolazione, mediata dal cAMP, della produzione di citochine e dell'attività delle cellule T. Una segnalazione disfunzionale di ADORA2A è stata implicata in disturbi neurodegenerativi e neuropsichiatrici, nell'immunosoppressione associata al microambiente tumorale e in processi infiammatori cardiopolmonari, supportandone l'impiego come bersaglio meccanicistico in modelli rilevanti per la malattia.

Adenosine A2A-R Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADORA2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADORA2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADORA2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADORA2A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.