Adenosine A2A-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400807-ACT

ADORA2A codifica il recettore dell’adenosina A2A (A2A-R), un recettore accoppiato a proteine G che segnala principalmente attraverso Gs, aumentando i livelli di cAMP e attivando programmi trascrizionali dipendenti da PKA/CREB. L’A2A-R integra segnali extracellulari di adenosina generati durante stress metabolico o infiammazione, modulando risposte come la produzione di citochine, l’attivazione dei leucociti e la segnalazione neuromodulatoria. Nel sistema nervoso centrale, ADORA2A è particolarmente espresso nei circuiti striatali, dove interagisce funzionalmente con la segnalazione dopaminergica per regolare la plasticità sinaptica e il controllo motorio. Una segnalazione aberrante di ADORA2A è stata implicata nella neuroinfiammazione e nei processi neurodegenerativi, nonché nell’immunosoppressione associata ai tumori, a supporto della sua utilità per lo studio delle vie di segnalazione in modelli di immunologia e neuroscienze.

Adenosine A2A-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADORA2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Adenosine A2A-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADORA2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADORA2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Adenosine A2A-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADORA2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Adenosine A2A-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Adenosine A2A-R nelle cellule tumorali con espressione di ADORA2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.