Plásmido Doble Nickase (h) ADE2: sc-418581-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ADE2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ADE2 (h) y el plásmido de doble nickasa ADE2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PAICS. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ADE2 | sc-418581-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ADE2 | sc-418581-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PAICS codifica la fosforribosilaminoimidazol-succinocarboxamida sintasa, comúnmente denominada ADE2, una enzima bifuncional que cataliza dos pasos secuenciales en la vía de biosíntesis de novo de purinas que conduce a la producción de monofosfato de inosina. Al controlar el flujo a través de la síntesis de nucleótidos de purina, ADE2 sostiene la síntesis de ADN/ARN, la homeostasis de ATP/GTP y el metabolismo proliferativo, con un fuerte acoplamiento al metabolismo de un carbono y a los procesos de rescate de nucleótidos. La alteración de la actividad de PAICS puede desplazar el equilibrio redox y biosintético celular, y se ha explorado en el contexto de estados asociados a la proliferación y de la reprogramación metabólica. PAICS también es relevante para estudiar el ensamblaje del purinosoma y la biosíntesis compartimentalizada de nucleótidos bajo condiciones variables de nutrientes.
ADE2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PAICS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PAICS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PAICS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PAICS alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.